PCR analýza: čo je to? Ako urobiť test PCR správne

Nie je to tak dávno, spoľahlivý,veľmi citlivú a rýchlu metódu diagnostiky rôznych infekčných ochorení človeka. Táto metóda sa nazýva "PCR analýza". Čo je to, čo bude jeho podstatou, aké mikroorganizmy to môže odhaliť a ako ju správne odovzdať, to povieme v našom článku.

História objavu

Vynájdený spôsob polymerázovej reťazovej reakcie (PCR)Americký vedec Cary Myullis v roku 1983. Spočiatku patentoval metódu diagnostiky spoločnosťou "Cetus Corporation", v ktorej jeho tvorca pracoval. Ale v roku 1992 boli všetky práva a patenty predané spoločnosti "Hoffman-La Roche". Potom sa zdalo, že paralelné podobné štúdie boli vykonané a boli zaznamenané ďalšími americkými biológmi, ako sú Alice Chen, David Edgar, John Treel. V roku 1980 sa s týmto problémom zaoberali sovietski vedci A. Slyusarenko, A. Kaledin a S. Gorodetsky. Preto nebolo možné určiť jediného nositeľa práv. Mnoho vynikajúcich biochemikov prispelo k vývoju metódy polymerázovej reťazovej reakcie a patentovalo ich inovácie. V súčasnosti sa analýza PCR vykonáva všade v špeciálne vybavených laboratóriách.

Podstatou diagnostickej metódy PCR

PCR analýza: čo je to a ako to funguje? Podstatou metódy je zvýšenie špecifického mikrobiálneho média pomocou špeciálneho enzýmu DNA polymerázy za umelých podmienok. Ak to chcete, vynásobte existujúci materiál DNA. Preto v prítomnosti patogénneho mikroorganizmu vo vzorke sa jeho množstvo zvýši biochemickými laboratórnymi manipuláciami a baktérie sa nedajú zistiť mikroskopom.

Analýza PCR - čo je to?

Ako sa uskutočňuje materiálový výskum?

Analýza vyžaduje:

  • DNA templát;
  • priméry spájajúce konce časti materiálu;
  • tepelne stabilný enzým DNA-polymerázy;
  • chemické látky, ktoré zabezpečujú riadne fungovanie enzýmov;
  • tlmivý roztok potrebný na vytvorenie vhodných podmienok pre rast a vývoj DNA materiálu.

    PCR analýza 12

Na uskutočnenie PCR sa uskutoční 25 až 30 opakovaní, pozostávajúcich z troch stupňov: denaturácia, žíhanie a predĺženie.

Na analýzu polymerázovej reťazovej reakciepoužite špeciálne zariadenie - zosilňovač. Moderné zariadenie vám umožňuje nastaviť potrebný program na vykurovanie a chladenie rúrok, aby sa odstránili chyby počas diagnostiky.

Kde sa používa diagnóza?

Metóda polymerázovej reťazovej reakcie sa používa v rôznych oblastiach medicíny:

  • Forenzní vedci ju používajú na identifikáciu genetického materiálu, ako sú vlasy, sliny alebo krv;
  • PCR analýza krvi pomáha pri genotypizácii, napríklad pri detekcii individuálnej geneticky modifikovanej reakcie na konkrétnu drogu;
  • pomocou takejto metódy vytvoriť existenciu rodinných vzťahov medzi ľuďmi;
  • najpopulárnejšia metóda PCR sa stala v lekárskej diagnostike pre definovanie rôznych infekčných ochorení.

Aké infekcie odhalili PCR?

Takže medicína dlho a úspešne použila analýzu PCR. Čo je to, už sme sa naučili. A aké patogény je možné s ním zistiť? Nasledujúce infekčné ochorenia sú diagnostikované pomocou PCR:

  • hepatitída A, B, C;
  • ureaplasmosis;
  • kandidóza;
  • chlamýdie;
  • mykoplazmózy;
  • bakteriálne vaginóza;
  • infekčná mononukleóza;
  • trichomoniáza;
  • infekcia papilomavírusu;
  • tuberkulóza;
  • herpesová infekcia 1. a 2. typu;
  • Infekcia Helicobacter pylori;
  • cytomegalovírus;
  • záškrtu;
  • salmonelóza;
  • Infekcia HIV.

    PCR analýza pre HIV

Pri diagnostike rakoviny sa používajú tiež metódy PCR.

výhody spôsobu

Diagnóza PCR má niekoľko výhod:

  1. Vysoká citlivosť. Dokonca len s niekoľkými molekulami DNA mikroorganizmu analýza PCR určuje prítomnosť infekcie. Metóda pomôže pri chronických a latentných ochoreniach. Často v takýchto prípadoch je mikroorganizmus nekultivovaný inými spôsobmi.
  2. Pre štúdium je vhodný akýkoľvek materiál, ako sú sliny, krv, pohlavie, vlasy, epiteliálne bunky. Najčastejším je krvný test a urogenitálny náter na PCR.

    PCR: vykonajte test

  3. Nevyžaduje dlhodobé pestovanie plodín. Automatizovaný diagnostický proces vám umožňuje získať výsledky štúdie po 4-5 hodinách.
  4. Metóda je takmer 100% spoľahlivá. Boli zaznamenané iba jednotlivé prípady falošne negatívneho výsledku.
  5. Schopnosť identifikovať niekoľko typovpatogény z jedinej vzorky materiálu. To nielen urýchľuje proces diagnostiky ochorenia, ale tiež výrazne znižuje náklady na materiál. Lekár často predpisuje komplexnú analýzu PCR. Cena vyšetrenia pozostávajúca z definície šiestich patogénov je približne 1500 rubľov.

Odporúčania na prípravu analýzy

Aby výsledky boli spoľahlivé v štúdii PCR, analýza by mala byť vykonaná na základe odporúčaní pre prípravnú diagnostiku:

  1. Pred odvyknutím od sliny by ste sa mali zdržať užívania potravy a liekov 4 hodiny predtým, ako ste odniesli materiál. Okamžite pred procedúrou opláchnite ústa vaanou vodou.
  2. Hore uvedené pravidlá by sa mali dodržiavať pri odoberaní vzorky z vnútorného povrchu tváre. Po opláchnutí sa odporúča vykonať ľahkú kožnú masáž na izoláciu sekrécie žľazy.
  3. Moč zvyčajne pochádza doma. Aby ste to urobili, musíte vykonať dôkladné toalety pohlavných orgánov. Je potrebné odobrať 50-60 ml moču v sterilnej plastovej nádobe. Aby bola zaistená čistota materiálu, odporúča sa, aby ženy vložili do vagíny tampón a muži maximálne vytiahli kožný záhyb. Materiál nemôžete odobrať počas menštruačného toku.
  4. Pre spermie sa musíte zdržať sexuálneho správaniaZačnite 3 dni pred zberom. Tiež lekári odporúčajú odmietnuť navštíviť saunu a užívať horúce kúpele, konzumovať alkohol a korenené jedlá. 3 hodiny pred testom sa musíte zdržať močenia.
  5. Na dodávanie urogenitálneho náteru, napríklad akje vykonaná analýza chlamýdiovej PCR, u žien a mužov sa odporúča sexuálny odpočinok počas 3 dní. 2 týždne pred testom sa nemajú užívať antibakteriálne lieky. Na týždeň musíte prestať používať intímne gély, masti, vaginálne čapíky, syringing. 3 hodiny pred testom sa musíte zdržať močenia. Počas menštruácie sa zhromažďovanie materiálu nevykonáva, iba po 3 dňoch po ukončení odberu krvi môže urogenitálny náter.

PCR počas tehotenstva

V období očakávania dieťaťa veľa infekčnýchPohlavne prenosné choroby sú extrémne nebezpečné pre normálny vývoj plodu. STD môžu vyvolať intrauterinnú retardáciu rastu, potrat alebo predčasný pôrod, vrodené malformácie dieťaťa. Preto je mimoriadne dôležité, aby sa podal skorý PCR test. Pri registrácii je potrebné predložiť analýzu - až 12 týždňov.

Analýza Chlamydia PCR

Plotový materiál pochádza z cervikálneho kanálapomocou špeciálneho štetca. Postup je bezbolestný a nepredstavuje nebezpečenstvo pre dieťa. Normálne počas tehotenstva analyzoval pre metódu PCR Chlamydia, rovnako ako ureaplasmosis, mykoplazmózy, cytomegalovírusu, herpes, papilloma vírusu. Takýto súbor vyšetrení sa nazýva PCR-6.

PCR na diagnostiku HIV

V súvislosti so skutočnosťou, že metóda polymerázovej reťazovej reakciereakcia je veľmi citlivá na zmeny v tele a na podmienky diagnózy, mnohé faktory môžu ovplyvniť výsledok. Preto analýza PCR na infekciu HIV nie je spoľahlivou metódou, jej účinnosť je 96-98%. Vo zvyšných 2-4% prípadov test prináša falošné pozitívne výsledky.

Ale v niektorých situáciách bez PCR diagnostiky HIVneriadiť. Zvyčajne sa podáva ľuďom s falošne negatívnym výsledkom ELISA. Takéto indikátory naznačujú, že osoba ešte nevytvorila protilátky proti vírusu a tieto nemôžu byť detegované bez násobného zvýšenia počtu. To sa dá dosiahnuť vykonaním krvného testu metódou PCR.

Táto diagnóza je tiež potrebná pre deti prvého roka života, ktoré sa narodili z HIV pozitívnej matky. Metóda je jediný spôsob, ako spoľahlivo určiť stav dieťaťa.

PCR na diagnostiku hepatitídy

Metóda polymerázovej reťazovej reakcie umožňujedetegovať DNA vírusu hepatitídy A, B, C dlho pred vznikom protilátok proti infekcii alebo výskytu príznakov ochorenia. Zvlášť účinná je analýza PCR pre hepatitídu C, pretože v 85% prípadov takáto choroba prebieha asymptomaticky a bez včasnej liečby prechádza do chronickej fázy.

PCR krvný test

Včasná detekcia patogénu pomôže predchádzať komplikáciám a dlhodobej liečbe.

Komplexný prieskum PCR

Komplexná PCR analýza: čo je to?Táto skúšobná metóda polimezarnoy reťazovú reakciu, ktorá zahŕňa stanovenie súčasne niekoľko druhov infekcie: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, cytomegalovírus, Ureaplasma urealitikum, herpes 1. a 2. typu, kvapavka papilomavírusu. Cena tejto diagnózy sa pohybuje v rozmedzí od 2000 do 3500 rubľov. v závislosti na klinických, materiálov a zariadení, ako aj od druhu analýzy: kvalitatívne alebo kvantitatívne. Čo je potrebné vo vašom prípade - lekár rozhodne. V niektorých prípadoch stačí jednoducho detekovať prítomnosť patogénu v iných odvetviach, ako je HIV, dôležitú úlohu, ktorú hrajú kvantitatívne titra. len "PCR analýza 12" v diagnostike všetky vyššie uvedené skúšky patogény.

Vysvetlenie výsledkov analýzy

Dekódovanie analýzy PCR nie je ťažké.Existujú iba 2 stupnice indikátora - "pozitívny výsledok" a "negatívny výsledok". Ak je patogén zistený, lekári môžu potvrdiť prítomnosť ochorenia s 99% istotou a pokračovať v liečbe pacienta. V kvantitatívnej metóde určenia infekcie v príslušnej kolóne bude uvedená číselná hodnota detegovaných baktérií. Len lekár môže určiť stupeň ochorenia a predpísať potrebnú liečbu.

Kde prechádza analýza PCR?

V niektorých prípadoch, napríklad pri určovaníHIV infekciou metódou PCR s negatívnym výsledkom, je potrebné vykonať ďalšie vyšetrenia na potvrdenie výsledkov.

Kde vykonať analýzu?

Kde predložiť analýzu PCR:v štátnom polyklinickom alebo v súkromnom laboratóriu? Bohužiaľ, v mestských zdravotníckych zariadeniach sú zariadenia a metódy často zastarané. Preto je lepšie uprednostniť súkromné ​​laboratóriá moderným vybavením a vysokokvalifikovaným personálom. Okrem toho v súkromnej klinike získate výsledky oveľa rýchlejšie.

V Moskve ponúka mnoho súkromných laboratóriívykonanie analýzy PCR na rôznych infekciách. Napríklad v klinikách, ako sú Vita, Komplexná klinika, Happy Family a Uro-Pro, sa vykonáva analýza PCR. Cena skúšky je od 200 rubľov. pre definíciu jedného patogénu.

Možno konštatovať, že diagnóza infekčnýchPCR vo väčšine prípadov je rýchlym a spoľahlivým spôsobom detekcie patogénu v tele v raných štádiách infekcie. Ale v niektorých prípadoch je vhodné vybrať iné metódy diagnostiky. Potrebu vykonať takúto štúdiu môže určiť iba špecialista. Dekódovanie analýzy PCR vyžaduje aj profesionálny prístup. Dodržujte odporúčania lekára a nevykonávajte testy, ktoré nie sú potrebné.

páčilo sa:
1
Rozbor moču Nechiporenko. Ako ho zhromažďovať
Všeobecná analýza moču. Ako si vziať a čo je normou?
Ako sa testuje okultná krv vo stolici?
Kde sa má začiarknuť na analýzu? Čo robiť, keď
Ako správne odovzdať analýzu výkalov a či je to potrebné
Ako správne darovať krv na hormóny?
Môže sa urobiť krvný test na HIV
Ako správne podať test moču?
Čo bude znamenať analýza moču (dekódovanie)
Najčastejšie príspevky
hore